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TTC法是抗生素殘留量檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)(GB4689.27—94)的檢測(cè)法，屬生物檢測(cè)法。其測(cè)定原理基于抗生素對(duì)微生物的抑制作用。如果牛奶中含有抗生素，則加入菌種(嗜熱鏈球菌)經(jīng)培育2.5~3小時(shí)后,加入TTC指示劑(三苯基四氮唑)不發(fā)生還原反應(yīng),所以樣品呈無色狀態(tài);如果牛奶中不含抗生素,則樣品呈紅色.這樣實(shí)驗(yàn)后樣品顏色不變的為陽性,樣品染成紅色的為陰性。
TTC法的具體操作步驟:
1.菌液制備:將單菌種(嗜熱鏈球菌)以脫脂乳為培養(yǎng)基,在36±1℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)15小時(shí)后,再以脫脂乳以至于1:1稀釋待用;
2.取待檢樣液9mL,在80℃水浴加熱5分鐘后冷卻到37℃以下,加活菌液1mL,在36℃±1℃水浴2小時(shí),加入4%的TTC指示劑0.3mL, 36℃±1℃水浴培養(yǎng)30分鐘;
3.若樣液顏色不變?yōu)殛栃?/font>,呈紅色為陰性;若陽性的樣液,再置于水浴中培養(yǎng)30分鐘,不顯色的為陽性,呈紅色為陰性.
TTC法測(cè)定各種抗生素的靈敏度為:青霉素:4ppb,鏈霉素:500ppb,慶大霉素:400ppb,卡那霉素:5000ppb.它具有費(fèi)用低,易開展的優(yōu)點(diǎn);缺點(diǎn)是耗時(shí)長(zhǎng)，要求操作人員需有一定專業(yè)知識(shí)且實(shí)驗(yàn)過程中菌液的制備、水浴過程控制都要求嚴(yán)格遵守操作規(guī)程，否則易出現(xiàn)假陽性，以致出現(xiàn)檢驗(yàn)結(jié)果的不穩(wěn)定性。
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