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食品大腸菌群檢測常見問題

點擊次數:2388  更新時間:2022-03-16
1:食品中大腸菌群的檢測有兩個標準三種方法,該如何選擇呢?


A:依據產品標準的項目單位
1.1、若單位為CFU/g,則選擇GB 4789.3-2016第二法(平板計數法)
1.2、若單位為MPN/g,則選擇GB 4789.3-2016法(MPN計數法)
1.3、若單位為MPN/100g,則選擇GB/T 4789.3-2003。

2:MPN法3個適宜的連續稀釋度該怎樣選擇?
A:依據產品標準的項目標準值
2.1、若標準值為<3.0MPN/g,則選擇0.1g、0.01g、0.001g三個稀釋度。
2.2、若標準值為≤30MPN/100g,則選擇1g、0.1g、0.01g三個稀釋度。

樣品采集

怎樣采樣,才能使樣品具有代表性?

這里將樣品分為兩類:預包裝食品和散裝食品或現場制作食品

(1)、對于預包裝食品
① 應采集相同批次、獨立包裝、適量件數的食品樣品,每件樣品的采樣量應滿足微生物項目檢驗的要求。
② 獨立包裝小于、等于1000g 的固態食品或小于、等于1000mL 的液態食品,取相同批次的包裝。
③ 獨立包裝大于1000mL 的液態食品,應在采樣前搖動或用無菌棒攪拌液體,使其達到均質后采集適量樣品,放入同一個無菌采樣容器內作為一件食品樣品;大于1000g 的固態食品,應用無菌采樣器從同一包裝的不同部位分別采取適量樣品,放入同一個無菌采樣容器內作為一件食品樣品。

(2)、對于散裝食品或現場制作食品
用無菌采樣工具從 n 個不同部位現場采集樣品,放入 n 個無菌采樣容器內作為 n 件食品樣品。每件樣品的采樣量應滿足微生物項目檢驗單位的要求。

培養基制備過程容易出現問題解答

1、異常現象一:培養基不凝固
原因分析:
①制備過程中過度加熱;
②低pH造成培養基酸解;
③稱量不正確;
④瓊脂未*溶解;
⑤培養基成分未充分混勻。
2、異常現象二:pH不正確
原因分析:
①制備過程中過度加熱;
②水質不佳;
③外部化學物質污染;
④測定pH時溫度不正確;
⑤pH計未正確校準;
⑥脫水培養基質量差。
3、異常現象三:顏色異常
原因分析:
①制備過程中過度加熱;
②水質不佳;
③pH不正確;
④外來污染;
⑤脫水培養基質量差。
4、異常現象四:產生沉淀
原因分析:
①制備過程中過度加熱;
②水質不佳;
③脫水培養基質量差;
④pH計未正確控制。
5、異常現象五:培養基出現抑制/低的生長率
原因分析:
①制備過程中過度加熱;
②脫水培養基質量差;
③水質不佳;
④使用成分不正確,如:成分稱量不準,添加劑濃度不正確;
⑤制備容器或水中的有毒殘留物。
6、異常現象六:選擇性差
原因分析:
①制備過程中過度加熱;
②脫水培養基質量差;
③配方使用不對;
④添加成分的加入不正確,例如加入添加成分時培養基過熱或添加濃度錯誤;
⑤添加劑污染。
7、異常現象七:污染
原因分析:
①不適當的滅菌;
②無菌操作技術存在問題;
③添加劑污染。

實驗過程

1、平板法VRBA傾注完,待瓊脂凝固后為什么需要加3-4mL的覆蓋層?
A:因為大腸菌群是需氧及兼性厭氧的,再加一層瓊脂相當于造就一個半厭氧環境,促進兼性厭氧菌的生長,同時抑制其他菌的生長。除此之外,還有防止菌落蔓延的作用,防止遷徙性菌落對菌落計數構成影響。例如一些變形桿菌就會有遷徙現象,從而導致菌落長成一片無法區分。在表面多覆蓋一層培養基就可以避免這種情況的發生。

2、GB 4789.3-2016平板法驗證菌落如何挑取?
A:分別計數平板上出現的典型和可疑大腸菌群菌落數。按比例挑取10個不同類型的典型和可疑菌落,少于10個菌落的挑取全部典型和可疑菌落。假如在1:10的平板上可疑大腸菌群有10個,典型大腸菌群有6個。證實實驗應該按照可疑跟典型5:3的比例進行挑取,移種于BGLB肉湯管內。

結果處理


1.所有稀釋度都不在計數范圍內怎么辦?

這種情況一般都是稀釋度的平板都小于15CFU,這種情況就是以稀釋度的平板菌落數乘以驗證試驗的比例來計算。例如10倍稀釋的兩個平板上菌落數分別為10、8,菌落數為10的平皿挑取10個菌落復發酵中有8個菌落產氣,菌落數為8的平皿挑取8個菌落復發酵中有7個菌落產氣,則計算過程是這樣的:(10*8/10+8*7/8)/2*10=75CFU/g(mL)。

 

2.連續兩個稀釋度的四個平皿的菌落數都在計數范圍內怎么辦?

這個需要參考菌落總數檢測國標里7.1.2里的公式計算。我們需要先計算每個平皿的驗證后的菌落數,再代入公式計算即可。例如10倍稀釋度兩個平皿菌落數為120和125,100倍稀釋度兩個平皿的菌落數為17和16,經過復發酵驗證產氣的管數分別為7、8、8、8,則我們先計算每個平皿上的菌落數分別為120*7/10=84,125*8/10=100,17*8/10=13.6(我們計14),16*8/10=12.8(我們計13),然后將84、100、14、13四個數代入公式:(84+100+14+13)/(2+0.2)*10=959,結果應報告960CFU/g(mL)。

 

3.只有一個稀釋度的一個平皿的菌落數在計數范圍,其他均不在計數范圍怎么辦?

這樣我們只需要復發酵驗證這一個平皿即可,根據這一個平皿的菌落數進行報告。例如10倍稀釋度兩個平皿菌落數為160和142,100倍稀釋度兩個平皿的菌落數為12和13,則我們只需要從菌落數為142CFU的平皿里挑取10個菌落進行復發酵驗證即可,假如共有7支發酵管陽性,則應計算142*7/10=99.4,結果報告990CFU/g(mL)。

 


注意:對于結果檢出的平板或試管需要經過無害化處理(121℃滅菌30分鐘)方能棄去,防止對環境造成污染



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